(1)雌、雄蛇的鑒別與選種烏梢蛇雌雄體相近，雄烏梢蛇的頭部較大，腹鱗較小，尾下磷多，尤其是尾基部較雌蛇長，有一對“半陰莖”而稍微膨大。最準確的鑒別方法是將烏梢蛇后半部分的腹面向上，找出其肛孔后，用大拇指按壓肛孔后面幾厘米處，從后往前擠壓，肛孔有一對“半陰莖”伸出。雌蛇的頭部較雄蛇略小，腹鱗較多，尾下鱗較少，尾較雄蛇短，且尾部自肛孔以后突然變細，肛孔平凹，用上述同樣方法用大拇指按壓肛孔后面幾厘米處，從后向前擠壓沒有一對“半陰莖”伸出。
選擇蛇齡3歲以上，體重大于40(]克的體質強壯、無傷病、生長發育良好、活潑好動、爬行靈活、蜷縮能力強、動作迅猛有力、毒蛇具有完整的毒牙、繁殖能力強的優良種用蛇。配種的雌、雄蛇比例可按5～8：1。
(2)交配與產卵應將非繁殖期性成熟的成年雌、雄蛇分開飼養，每年的5～7月份是烏梢蛇的繁殖期。種蛇選配時要盡量依據系譜資料，避免近親交配，有利于提高繁殖仔蛇的成活率。蛇發情時，按比例將種用雄蛇放人種用雌蛇群中，讓其自由交配。交配后應做記錄建立繁殖檔案，并再把雌、雄蛇分開飼養，防止雄蛇干擾孕蛇休息。雌、雄蛇交配后一般性情較為溫馴。為了檢查雌蛇是否懷卵，用一只手輕輕捏住其頸部，另一只手從雌蛇的腹部開始撫摸至肛孔，如已懷孕其腹部有凸凹感，如果凸凹處距肛孔越近，表明此蛇離卵產出日期越近。如發現凸凹處距肛孔僅有2～3厘米時，表明此蛇即將臨產(一般1天內會產卵)，應將臨產的蛇關進蛇箱或產卵房中產卵。每次產卵5～17枚。雌蛇產卵沒有固定位置，一旦發現蛇卵應及時收集孵化，防止蛇卵受到長時間的陽光暴曬和風吹雨打，使蛇卵受溫度和濕度不均等因素的影響而降低蛇卵的孵化率。
(3)人工孵化選擇飽滿、色澤一致、外形端正的種蛇受精卵放人人工孵卵容器內人工控制溫度孵化。孵化器大多采用大口缸罐、桶或箱作容器。器底部墊上一層約30厘米厚的干凈沙土(沙土比例為3：1)，濕度以手能握成團、松開即散為宜，并將其壓實，然后把蛇的受精卵橫臥(不可直豎)排放在容器內的沙土上，在卵上加10厘米左右的沙土，高寒地區可在孵化器內蓋上棉花保溫，然后將孵化器放置室內并加蓋，防止老鼠、螞蟻和蚊蟲等對蛇卵的侵害。并注意保持28～30℃以上的有效孵化溫度相對穩定，若低于20℃，會使孵化期延長甚至蛇卵難以孵出仔蛇；若溫度偏高，雖提前孵出仔蛇，但畸形仔蛇和死亡率增加。并應經常噴水，使沙土保持絕對濕度在15％左右，每隔7～10天翻卵1次，照卵檢查其胚胎發育情況，發現未受精卵或死胚卵應及時撿出。
