性成熟的標志是雄性睪丸和雌性的卵巢中開始具有成熟的性細胞，可以進行交配繁殖。雄 性較雌性的成熟期稍早，小型的蛇較大型的蛇成熟快。生活在北方寒冷地方的蛇，性成熟 要慢些，如極北蝰蛇雄性在第4年體長440mm?510mm時、雌性于第5年體長550mm? 625mm時才達到性成熟。相反，熱帶的蛇，由于冬眠期極短甚至無冬眠期，生長可不間斷 地進行，性成熟要早些，如爪哇的棱鱗鈍頭蛇在第13個月達性成熟，紅脖游蛇和滑鼠蛇分 別在第13個月和1年零8個月達到性成熟。浙江蝮蛇2年后達性成熟。
交配前，雄蛇主動尋覓雌蛇，稱為逐偶。嗅覺在逐偶過程中起重要作用，即交配季節， 雌蛇的皮膚和尾基嗅腺分泌出一種特有的強烈氣味，雄蛇可跟蹤氣味找到雌蛇。冬眠群居 有利于增加雌雄蛇相遇的機會。春天出蟄后，雌雄蛇往往就在冬眠場所附近進行交配，然 后才分散尋食活動。
兩性相遇后，主要借嗅覺相互識別，雄性以交配器插入雌性的共泄腔進行交配，每次 交配只使用一側的交配器。在交配季節，一條雄蛇可與若干雌蛇交配，而雌蛇只能交配1 次，故人工養蛇可以一雄數雌的比例配養。交配期除了春末夏初外，還有一次秋季交配期。 一次交配時間可延續30min至一整天不等，如蝮蛇近30min，五步蛇數小時，黑眉錦蛇11h，紅點錦蛇長達20h。交配后，精子留存于雌性輸卵管及共泄腔壁，待排卵時受精，開始 胚胎發育。精子在雌蛇輸卵管內可存活3年?5年。金華衛校的何時新曾把一條雌蛇單獨 飼養，連續3年產仔。據國外資料，有一條美洲貓眼蛇在與雄蛇隔離6年之后還產過一批 受精卵，一條森王蛇與雄蛇隔離4年之后也還產過受精卵。
