早在蛇傷治療中蛇毒對凝血系統的影響即已為人們所注目。蛇毒對凝血系統的影響 的研禿除促進了蛇毒藥理學和毒理學發展之外，還促進了血液凝固機制研究的發展。血液 凝固“瀑布學說”的建立也是與蛇毒對血液凝固系統影響的研究密切相關的。

蛇毒對凝血系統的影響除促凝作用和抗凝作用外，還有纖溶作用。凝血和纖溶這一對 相反的生理過程在體內組成一個精密的生物調控系統，用以維持正常的血液循環。而蛇毒 中的不同毒素或組分對凝血和纖溶的各步反應，幾乎都有不同的影響。

一、蛇毒促凝組分的鑒定

(一） 類凝血酶測定的生物學方法

精氨酸酯水解酶類中有不少是具有類凝血酶活性的，前面敘述的方法都是酯酶檢測 方法，它們對于類凝血酶的檢測并不十分專一，因而要確定具有精氨酸酯酶活性的酶是否 也具有類凝血酶活性，必須用一些生物學方法確證。

本方法是用反應板或試管法測定凝血活力。用反應板時，配制0. 5%的人纖維蛋白原 于0.05mol/L pH7.4 Tris-HCl緩沖液中，取0.2ml于反應板凹孔中，加0. lml待測酶 液，記錄纖維蛋白原形成纖維蛋白細絲的時間，以剛能被細玻棒挑起細絲所需時間為準。 用試管法時，取0. 5ml上述纖維蛋白原溶液于小試管中，加0. lml待測酶液，記錄纖維蛋 白原溶液變渾凝固時間，凝固以溶液在側轉試管時不再流動為準。酶活力單位通過與已知 活力單位的凝血酶比較進行確定(Sato，1965)

(二） 復制靜脈血栓形成的大鼠模型(李磷仙等，1982)

蛇毒中有多種能在動物體內除去血栓作用的組分，為了模擬體內的作用，有必要復制 動脈、靜脈血栓。

肌注4%戊巴比妥鈉(40mg/kg)使大鼠麻醉，將大鼠仰臥固定于動物手術臺上，于腹 正中線切開皮膚約3cm，從腹白線切開腹膜，按Reyers等的方法略加改進，分離下腔靜 脈，于左腎靜脈下方用粗細線結扎下腔靜脈，縫合腹壁。結扎后2h重新開腹，在結扎下方 2cm處用止血鉗夾住血管，將該段管腔內的血液吸進，然后縱行剪開管腔，觀察有無血栓 形成。若已形成血栓，則取出血栓，放入真空干燥器內干燥,24h后稱栓子重量，并計算血 栓形成百分率，作為判斷藥物療效的指標。

(三） 復制動脈血栓形成的大鼠模型(李磷仙等，1982)

大鼠麻醉，固定方法同上，然后按Hladovee法以及Vigdakl法加以改進，剝離一側頸 總動脈15mm長，用一小塊塑料布遮蓋傷口附近的組織以免組織溫度影響血管壁的表面 溫度。以不銹鋼電極將該段動脈輕輕提起，用1. 5mA直流電刺激7. 5min。每根不銹鋼電 極的直徑為1. 3mm，兩電極間距1. 5mm。刺激前用半導體點溫計測頸總動脈遠端的表面 溫度值，然后進行刺激，在刺激后的60min內，每隔2min測定頸總動脈遠端的表面溫度1 次，并繪制溫度曲線。如果動脈內由于血栓形成堵塞血流，以致動脈血不能通過堵塞處流 向頭端，則遠端的溫度突降。從刺激開始至溫度突降的時間即為堵塞時間(OT)，其長短可 作為判斷藥物療效的指標，并做該段動脈的形態學檢查以與正常相比。

上述復制動脈、靜脈血栓模型的給藥方法為：按分組劑量，于結扎下腔靜脈或電刺 激頸總動脈前lh，從股靜脈內緩緩注入，l0min內注完。對照組注入等容積的生理鹽水。

(四） 纖維蛋白凝塊結構的電鏡觀察(管利豐等，1985)

按Kay(1967)等人方法略加修改。取0. lml人纖維蛋白原(5mg/ml)與0. lml人凝血酶液(40NIH單位/ml)或TLE(150fxg/ml)混和，取一滴混合液于涂碳膜之銅網上，于室 溫或37X3下放置一定時間后，用幾滴生理鹽水洗滌銅網，再以3滴1%醋酸鈾染色，蒸餾 水洗滌，并以濾紙吸去其多余水分，待銅網于空氣中干燥后，在電子顯微鏡下觀察凝塊結構。

(五）FPA(血纖肽A)、FPB(血纖肽B)樣品的制備(管利豐，1985)

蛇毒中的類凝血酶可以水解纖維蛋白原，產生FPA或FPB。這兩種肽的測定方法如 下：纖維蛋白原凍干粉溶于PH7. 4 0. 05mol/L Tris-HCl緩沖液，最終濃度5mg/ml,加 入人凝血酶或蛇毒TLE后反應一定時間，然后于沸水浴中加熱2min，使纖維蛋白沉淀， 離心分離沉淀蛋白后，再經高速離心（10 OOOr/min)后，取上清液作高效液相色譜分析。