許多學者發現某些蛇和哺乳動物血清中含有能中和蛇毒出血毒素的因子,稱為抗出 血毒素因子。為了搞清這種因子的作用機制,需要純化出大量的抗出血毒素因子。常規的分離法如凝膠過濾和離子交換層析法所需的時間較長,特異性不高,在每步分離中都有一 定量的損失,尤其抗出血毒素因子在血清中含量不高,用常規方法分離更困難。親和層析 是以大分子的結構和功能為基礎的一項分離技術,其特點為快速、特異性高和簡便,而且 損失也較常規法為小,尤其在所需成分含量低的情況下,這種方法有無比的優越性。這里 介紹Tarng等(1986)用親和層析法從一種袋鼠(D油血清中分離純化抗 出血毒素因子的大致過程。
先用 Sephadex G-200 和 DEAE-Sephadex A-50 柱分離血清中的抗出血因子。以分離的抗出血因子為抗原對BALB/C白鼠進行免疫,把被免疫后的白 鼠脾細胞和骨髓瘤細胞SP進行融合,所得的雜交細胞能分泌抗出血因子的單克隆抗體。 把雜交細胞注入BALB/C白鼠腹腔內使之產生大量腹水,腹水中的單抗體經DEAE- Sephadex A-50部分純化后聯結到經溴化氰活化的Sepharose 4B膠上。偶合后的親合柱 用來大規模分離抗出血因子,如圖3-13-58所示。




