有些蛇毒能水解L-亮氨酰-卩-萘胺,即含有所謂芳酰胺或氨基酸萘胺酶。這種酶水解 上述底物產生L-亮氨酸和卩-萘胺,第一次由Michl等(1965)發現,且他們在幾種眼鏡蛇、 蝰蛇和響尾蛇蛇毒中都發現了這種酶。Tu等(1967)對來源于4個科的47種蛇毒進行了 研究,發現幾乎都有這種酶的活性,其中白唇曼巴、泰攀蛇 、銀鱗蜂( 和食魚魚腹蛇毒顯示很強活性。一般地說,這種酶在眼鏡蛇毒和蝰蛇毒中活性較高,而海蛇毒 中活性較低,響尾蛇毒中活性更低,蝮屬蛇毒要比其他屬蛇毒活力高一些。
迄今為止,除Oshima等(1968)從日本蝮蛇 蛇毒中部分 純化出這種芳酰胺酶外,尚未得到這種酶的純品。按照他們的研究結果,這種酶不太穩定, 在70℃保溫30min完全喪失活性。該酶的最適pH為8. 5,對氯汞苯甲酸和Hg2+能強烈 抑制其活性,這說明該酶的活性中心含有巰基。EDTA和DFP不影響活性,CN對活性有 加強作用,水解L-亮氨酰-13萘胺的Km = l. 5Xl(T3mol/L,用凝膠過濾法測定其分子量 為128 000。
7-谷氨酰轉肽酶
7-谷氨酰轉肽酶(7-GT)廣泛存在于哺乳動物組織中,細菌中也有這種酶,屬于轉移 酶類,在體內能催化還原型的谷胱甘肽脫下t谷氨酸,并使后者轉移到氨基酸或肽上,因 此,在谷氨酰基轉移中起重要作用。蛇毒中存在多種酶,有天然酶庫之稱,其中是否存在 7-GT,過去一直未見較詳細的報道。我國周德義等(1986)發現蛇毒中有>GT存在。他們 選擇分屬于眼鏡蛇科的眼鏡王蛇.眼鏡蛇 金環蛇 、銀環蛇 ,竣亞科的蝮蛇
Pallas )、尖吻竣 ,蜂科中蜂亞科的圓斑蜂泰國亞種 ,海蛇科的青環海蛇 和平頦海蛇 等9種蛇毒為材料,比較Y-GT在這些蛇毒中的分布特點及電泳燈為。 實驗證明7-GT在蛇毒中的分布存在蛇科的專一性,以眼鏡蛇毒和眼鏡王蛇毒含量較豐 富,兩種環蛇毒含量較低。9種蛇毒經凝膠電泳后進行7-GT酶定位染色后可以看出,眼 鏡王蛇毒和眼鏡蛇毒存在一強一弱2條7-GT酶活性帶,青環海蛇毒和平頦海蛇毒也各 顯2條酶活性帶,但活性弱得多。2條7-GT活性帶遷移速度一快一慢,幾種蛇毒之間有一 定相似性。其他幾種蛇毒盡管都顯示一定的酶活力,但用酶定位的方法在凝膠上卻看不到 明顯的區帶,可能由于r-GT含量微,受實驗方法靈敏度所限之故。對分子量進行測定,可 見眼鏡王蛇毒、眼鏡蛇毒、青環海蛇毒和平頦海蛇毒都含有兩種分子量的1GT,低分子 量組分變化在15萬?25萬之間,高分子量組分在80萬左右。但眼鏡王蛇毒例外,它的高 分子量組分為55萬。在梯度凝膠電泳中,幾種7-GT含量高的蛇毒呈兩條酶活性帶,當進 行等電聚焦方法電泳時,酶活性帶增多,如眼鏡蛇毒r-GT多達5條酶區帶。在酶活性較 低的幾種蛇毒的梯度凝膠電泳圖上看不出明顯的酶活性帶,但可以觀察到弱的酶活性帶。 各種蛇毒的IGT等電點在4?7之間。除眼鏡蛇毒和眼鏡王蛇毒外,其他蛇毒都存在一 條PI接近4. 20的區帶。
Nayers和Wellner曾認為產生不同分子量及等電點的同工酶原因是由于:①酶分子 的酰胺基數目或位置不同;②它們的含糖量不同;③分子的構象不同從而產生細微不均一 性。吳祥提等人認為上述原因還不能解釋同工酶分子大小相差很大的問題。從一些酶的 同工酶之間分子量大致存在一個倍數關系提示我們,上述幾種酶在天然毒液中可能存在 分子之間聚集作用,當然也不能排除酶分子同蛇毒其他成分形成復合物的可能。
文獻報道從哺乳動物肝、腎等組織純化的7-GT其分子量多在9萬?12萬之間。還有 報道指出,純化的r-GT在除去去垢劑后分子量增大,吳祥提等(1985)認為這是由于除去 去垢劑后酶分子重新發生聚集而引起的。在對胎兒組$ 7-GT的研究中也得到多種分子 量的7-GT同工酶,肝臟的Y-GT最低分子量組分是8萬。同工酶之間分子量似乎存在一 定倍數關系,這個結果提示可能存在分子的聚集。蛇毒也存在兩組不同分子量的酶,其分 子量較大,蛇毒7_GT與哺乳動物組織中r-GT的這種區別,主要是因酶來源不同。此外, 也不能排除酶分子本身聚集或酶分子與蛇毒中其他成分形成復合物等因素。




